• <em id="jhb0x"></em>
    <em id="jhb0x"></em>
      <button id="jhb0x"><object id="jhb0x"></object></button>
      <em id="jhb0x"></em>

      <dd id="jhb0x"></dd>

      <dd id="jhb0x"><center id="jhb0x"></center></dd>
       
       
      首頁 產品中心 品牌代理 試驗方法 下載中心 精彩推薦 關于寶科 聯系我們
      產品搜索
      貨  號:
      產  品:
      供應商:
      抗體高級搜索
      抗體名稱:
      抗體來源:
      反應種屬:
      用途:
      產品專題
      PRODUCTS
      第一章 細胞因子及其ELIS
      第二章 細胞凋亡和細胞增殖
      第三章 細胞生物學研究
      第四章 研究專題
      第五章 信號轉導和藥物開發
      第六章 免疫學制品
      第七章 PCR & RT-P
      第八章 分子克隆
      第九章 核酸純化和分子量Ma
      第十章 轉 染
      第十一章 核酸標記及檢測
      第十二章 蛋白質研究
      附錄一 常用實驗方法
      友情鏈接
      Links
      您現在的位置:首頁 -->試驗方法--> 詳細信息
      免疫沉淀(IP)常見問題分析
      下載地址:
      免疫沉淀(IP)常見問題分析
      問題
      可能原因
      解決辦法
      高背景
      吸取了不溶于去污劑中的蛋白(沉淀)
      離心后立刻吸取上清,如果發生了重懸,則需要再次離心
      洗滌不完全
      在洗滌過程中將試管蓋好蓋子,倒轉混勻幾次保證洗滌充分后再離心
      非特異蛋白結合到珠子上了
      珠子沒有被充分封閉。確定使用所有BSA(fraction V)是新鮮配制的,用1%BSA的PBS封閉新鮮準備的珠子1hr。進行IP前使用PBS洗滌3-4次
      所用抗體純度不夠
      使用親和純化的抗體,有限預吸附過的抗體
      抗體用量過多導致非特異性結合
      確認推薦的抗體用量,減少抗體用量
      細胞數過多/裂解物中蛋白含量過高導致洗脫液中含有大量非特異性蛋白
      減少細胞/裂解物用量,推薦使用10-500ug細胞裂解物
      非特異性蛋白結合抗體
      減少上樣量。也可以在進行IP前將裂解物和珠子預孵育從而達到預純化裂解物的目的。也有人使用和抗體來源及Ig亞型相同的無關抗體對裂解物進行預純化
      在免疫沉淀過程中蛋白降解了
      保證標本裂解時使用新鮮配制的蛋白抑制劑
      抗體洗脫過多 
      靶蛋白中含有過多的洗脫抗體
      降低抗體用量;在進行IP前將抗體交聯到珠子上;使用梯度甘氨酸緩沖洗脫液.
      洗脫液中檢測不到靶蛋白 
      標本中無靶蛋白表達,或者表達量非常低
      根據蛋白表達資料確定檢測標本中有靶蛋白的表達。如果蛋白表達水平很低,可以考慮增加裂解物的用量,但這樣會增加非特異性結合。因此建議在進行IP前先對裂解物進行預純化
      所有抗體量不足,難以捕獲靶蛋白
      根據推薦量使用抗體,并根據實驗結果優化抗體的用量.
      靶蛋白沒有從珠子上洗脫下來
      確定使用正確的洗脫液并保證洗脫液的強度和pH值是適用于靶蛋白的
      抗體沒有和免疫吸附的珠子結合
      根據抗體的亞型確定所用珠子是否合適(參照IP的方法部分
      所用裂解緩沖液不適合
      根據說明書確定該抗體檢測的是變性還是天然蛋白;然后保證所用裂解液是恰當的(參照IP的方法部分
       

      版權所有 2009 杭州寶科生物科技有限公司

      電話:0571-87046760 85976350 傳真:0571-87040537  電子信箱:info@bioke.cn 備案:浙ICP備09030217號-1