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      第一章 細胞因子及其ELIS
      第二章 細胞凋亡和細胞增殖
      第三章 細胞生物學研究
      第四章 研究專題
      第五章 信號轉導和藥物開發
      第六章 免疫學制品
      第七章 PCR & RT-P
      第八章 分子克隆
      第九章 核酸純化和分子量Ma
      第十章 轉 染
      第十一章 核酸標記及檢測
      第十二章 蛋白質研究
      附錄一 常用實驗方法
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      ELIspot常見問題分析
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      ELIspot常見問題分析
      問題
      可能原因
      解決方法
      背景高
      洗滌不充分
      顯色前后將板子的兩側均洗滌,以防部分試劑漏出后導致背景
      板中PVDF膜沒有充分干燥
      在讀板前將板子放在4℃過夜有利于將斑點和背景分開,減少背景
      板孔中細胞數量太多或者分泌蛋白過多
      優化細胞數量和刺激劑用量
      顯色時間過長
      實時檢測顯色過程,適時終止反應 
      加入BCIP/NBT顯色后,雙蒸水清洗,蘭黑色的背景和斑點衰減
      PVDF膜是濕的
      在PVDF膜完全干了以后再進行分析:將板放置37℃ 15-30分鐘或室溫60-90分鐘即可完全干燥
      板孔中斑點數量多而陽性對照孔很少
      孵育不完全
      可能堿性磷酸酶-鏈酶親和素和BCIP/NBT顯色液沒有平衡到室溫,使用之前將所需試劑平衡至室溫
      板孔中斑點密度太高
      板孔中細胞數量太多
      建議備比稀釋細胞,確定最佳細胞數量
      包被抗體過多
      減少包被抗體用量
      細胞刺激過度導致分泌蛋白過多
      減少刺激劑的使用,縮短刺激時間
      板空里的斑點數量比預計要少而陽性對照孔正常
      細胞刺激不夠
      保證用來刺激細胞的刺激劑具有很好的生物學活性:可在刺激完成后通過免疫細胞化學來鑒定刺激效果。延長并優化刺激時間
      板孔中細胞數量太少
      增加細胞數量
      抗體用量不夠
      增加包被抗體和檢測抗體的用量并進行優化
      顯色不充分
      實時檢測顯色過程,確定所用顯色劑是否失效
      孔中間出現空白
      膜被破壞
      更輕柔的操作和洗滌,不建議使用洗板機
      孔中出現空白區域
      膜沒有預處理
      確保膜用70%乙醇浸潤,隨后使用PBS洗滌3次
      操作過程中出現干膜
      確保檢測過程中膜不會出現干燥現象
      細胞分布不均勻
      將細胞混勻后再加入孔中,在刺激孵育過程禁止移動板子
      假陽性(使用培養基空白對照可以確定是否有假陽性)
      二抗聚集
      使用前過濾二抗
      膜上有殘留細胞存在
      刺激后充分洗滌,保證沒有細胞黏附在膜上
      細胞污染了
      盡可能保證所用試劑是清潔的,細胞培養用品是無菌的
      斑點聚集分界不清
      膜沒有預處理
      確保膜用70%乙醇浸潤,隨后使用PBS洗滌3次
      細胞聚集了
      在刺激孵育過程禁止移動板子
       

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