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      Abcam抗體保存指南
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      抗體保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當,大部分抗體活性都可以維持數月甚至數年。

      本指南以Abcam抗體保存方法為主,同樣也可以應用到其他絕大部分公司的抗體產品!

      請謹記!無論何時

      請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體!
      1. 收到抗體后請務必在12000rpm離心1-5分鐘后再打開管蓋進行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長離心時間至5分鐘,以保證全部抗體均離心下來)!
      Abcam的抗體使用非常特殊的儲存管,只有在12000rpm離心1-5分鐘才能將附著在管壁或蓋內的抗體全部離心下來。即使是在10000rpm離心也會導致離心不完全,導致出現抗體的量不足的現象!
      2. 對于Abcam大部分抗體,比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20℃ or -80℃ 。
        • 對絕大多數抗體來說,保存在-20℃是完全足夠了。沒有任何證據顯示保存在-80℃會有更多的好處!
        • 分裝可以最大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
        • 分裝的量以一次實驗用完為好,最少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發以及管壁吸附的影響
        • 復融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來!
        • 抗體工作液應該當天配制當天用完,在4℃ 盡量不要超過1天。
        • 絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層,而不是門上

      3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。

      如果抗體很快(1-2周)會使用,推薦在4℃保存,這是為了避免反復凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在-20℃ or -80℃。最關鍵的一點是要根據說明書推薦的方式來正確的保存抗體!

      但是,腹水形式的產品請在收到后立即凍起來!因為該類產品含有大量的蛋白酶,長期在4oC保存會導致抗體的降解!


      4. 大部分抗體的運輸條件:一般的運輸過程需要1-2周的時間,所以是在4℃的條件下來完成的。

         4℃運輸最主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害(如果使用干冰運輸,那么收到時抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程)。所以運輸過程中絕對避免干冰運輸!

      特殊抗體的保存條件:

      • 酶聯抗體:永遠保存在4℃,避免凍起來。否則會導致酶活性的下降或者喪失
      • 偶聯抗體:所有偶聯抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存。尤其是熒光抗體,對光極為敏感,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的!
      • IgG3的同型對照:永遠保存在4℃,避免凍起來。因為如果出現凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體
      無論是保存還是運輸,絕對避免反復凍融!

      反復凍融會導致抗體變性,導致多聚體形成,從而降低抗體的結合能力!

      抗體保存其它相關信息:

      關于加入甘油保存:

      有些人會加50%的甘油到抗體中來避免反復凍融,甘油在-20℃會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的。但是abcam僅對非常小的一部分抗體檢測過其在這種條件下的穩定性;而Abcam只對按照推薦條件保存的抗體提供質量保證!加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因為這已經超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請謹慎注意無菌操作,避免污染!

      關于蛋白保護劑:

      蛋白在高濃度時更不容易降解(1 mg/ml或者更高),這就是為什么在抗體中加入BSA之類作為穩定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話,則不能加入蛋白穩定劑,因為這些穩定劑會和抗體一起競爭結合標記物。

      關于疊氮化鈉(sodium azide)的使用:

      為了防止微生物污染,疊氮化鈉經常被加入到抗體中(終濃度0.02% (w/v))。Abcam的很多抗體已經含有了0.02%-0.05%的疊氮化鈉,在說明書的“Storage buffer”中有標明的。

      在下述情況中不能使用疊氮化鈉:

      • 如果抗體用于染色或處理活細胞,用于體內研究:

      疊氮化鈉在抵抗微生物的同時,對其它大部分有機物也是有毒的,因為它阻斷了線粒體的cytochrome electron transport system.

      • 要偶聯帶有氨基基團的抗體:

      疊氮化鈉會干擾任何含有氨基基團的偶聯,因此在進行偶聯之前,應將疊氮化鈉去除。偶聯后的抗體可以加入疊氮化鈉保存,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯的抗體,thimerosal (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護劑!

      注:疊氮化鈉的去除方式:

      可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除!IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 疊氮化鈉的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除

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